質譜是怎樣做到定量的?

時間 2021-05-06 18:11:44

1樓:

重新看了一眼題主的問題,大約明白了題主的真正的問題。題主理解的定量應該是所有的物質在質譜離子源的離子化難易程度一致,以為這樣檢測器相應才能正確反映物質濃度;但是各個物質離子化程度是不一樣的,所以沒法定量。

分歧是不是在這?

其實,不同物質對同一離子源的離子化反應程度就是不一樣的,這是物質的特性,我們也從來不是用絕對響應來對物質進行定量啊,檢測器本身還有噪音呢。

下面劃下重點:定量的核心是,質譜的離子源-質量分析器-檢測器的工作狀態是穩定的,能保證相同濃度的樣品進樣響應一致,才能對該樣品進行定量分析。定量資料的獲得是對同一樣品不同濃度下進樣所得訊號強度進行資料處理得到工作曲線(工作曲線反應了進樣濃度與響應訊號之間的函式),將未知濃度樣品的訊號響應帶入工作曲線計算來獲得該樣品濃度。

使用質譜進行定量工作的時候,工作曲線實際上把特定樣品的離子化難易程度進行打包處理了,絕對響應高低並不影響工作曲線的獲得。

這與質譜進樣方式有關。。

如果是色譜聯用定量,本質上還是在用色譜的邏輯,只不過質譜相比起fid ecd dad 紫外燈這些氣相液相常用的檢測器有更高的定性能力。

如果是icp ms或者針幫浦等直接進樣,就是根據相同離子源條件下形成的訊號強度比例進行定量。。。

2樓:

Jack Cheng和胡墨已經介紹得很清楚了,定量分內標法和外標法。我再補充下內標法和外標法中訊號強度(Intensity)是怎樣獲得的。拿胡墨貼出的這張圖為例:

圖1這張圖叫做Total ion current (TIC)。其橫座標是時間,縱座標是訊號強度。而質譜資料其實是三個維度的資料:

時間、訊號強度、質荷比。所以我們在做譜峰檢測(Peak detection)的時候,要選取某一特定質荷比範圍的TIC,這叫做Extracted ion chromatogram (EIC)。

圖2如圖2所示,某一待測物m/z在285.065和285.080之間,上圖是m/z與保留時間的關係,下圖是Intensity與保留時間的關係,圖中的每乙個點是質譜檢測到的Ion。

如下圖中形成了乙個譜峰,則說明在該處有物質被檢測到。我們通常所說的某一待測物質的訊號強度,是用該譜峰的峰面積來表徵的。當然,也可以用Intensity最高點(紅色的點)來表徵訊號強度。

參考文獻:Ralf Tautenhahn, Highly sensitive feature detection for high resolution LC/MS. BMC Bioinformatics, 2008

3樓:Luoyue121

大部分定量的道理都是一樣的。質譜和紫外是一樣的道理。通常要calibration curve 配上internal standard,這樣可以有效控制儀器測量和樣品製備的variance。

如果是Single Quad,一般用SIM/SIR來做定量。如果是Tandem Quad,一般用MRM來做定量,specificity和sensitivity比較高。如果是High Resolution,用Full Scan/MSMS/MRM等都可以。

4樓:Roger Lloyd

補充一句,因為質譜的multi channel plate 檢測器並不像UV的PDA檢測器一樣穩定,訊號的漲落非常大,所以加同位素內標是必須的。

5樓:

樓主的擔心就是,「質譜訊號的強度是和離子化難易相關,並不能反應待分析物的含量」。

所以必須要用同一種物質作為參比(同一種物質離子化,在相同條件下難易程度是一樣的),才能做到絕對定量。這就叫外標法定量。

後面很多人洋洋灑灑寫很多內標法,其實跟樓主的擔心沒什麼關係。等他弄明白這個才能做別的。

6樓:聰明蘑菇大眼睛

你的問題太籠統了

無機質譜儀有機質譜等離子質譜飛行質譜都是不一樣的

簡單來說,四級杆和串接杆是因為載入不同電壓的時刻允許通過的離子質量是一定的(與運動半徑有關);飛行質譜是因為在磁場和電廠力作用下,不同電荷不同質量飛行時間不同;至於質譜儀的定性功能,無機來說離子的質量就代表原子序數,對於化合物來說,通過撕裂和化學變化(依次計算羥基、羰基等集團的個數)隨後對比資料庫,就能知道分子結構。

7樓:

以一系列已知濃度的目標物做一條標準曲線,線性關係好的話,我們就認為在這個濃度範圍,訊號強度和目標物濃度符合此標準曲線函式,然後根據實際樣品中目標物訊號強度帶入標準曲線函式,算出濃度

8樓:莫奇妙

同一時間撞擊檢測器的離子越多,其輸出的訊號強度越大,此訊號的強度就是定量的依據。對訊號進一步處理,同一時間段內的訊號就是不同離子訊號的集合,以最強的訊號為100%作圖,就可以得到質譜圖,這是定性的依據。

9樓:

補充一下那位大美女的答案,定量先看一下樣品是否經過了色譜分離,如果是氣質聯用那麼就只能跟王力巨集比了,作為男生對這個比喻保留一件。

還有就是等離子電離,EI之類的一股腦把東西電離了可以用內標和電離效率定量。

有些情況下可以用同步輻射光源來做,效果更好。

10樓:王懂

最近用液質聯用色譜測生物樣品含量

說說怎麼定量計算的過程…

首先用待測物質的標準品配製一系列不同濃度的溶液,進樣分析,在質譜工作站多反應檢測模式下積分該物質的峰面積,對應濃度建立標準曲線

然後採樣品進樣分析,同樣在多反應檢測模式下積分該物質的峰面積,帶入標準曲線就可以算出樣品中該物質的濃度…

至於如何確保定量的準確性…樣品中可以加入內標物,確保沒有樣品中沒有干擾即基質效應,質譜執行中還有參比溶液和校正溶液用於調諧或校正

11樓:Jack Cheng

任何物理量的定量過程都無非是和「尺子」去對比,質譜分析當然也不例外。

要實現質譜定量分析一般有兩種方法。

1. 外標法。

將待測物質A的標準品(特點是純度非常高,有時也可稱之為該物質的純品)用某種有機溶劑S稀釋成不同的濃度的標準溶液,分別取等量(一般是等體積)的這些不同濃度的標準溶液進行質譜分析。由此可以得到一組樣品量和訊號值一一對應的資料,以其繪製成的曲線稱為標準曲線。現在就有了一把還不錯的尺子,然後就可以去拿要檢測的實際樣品R進行質譜分析了。

根據標準曲線就可以由得到的訊號值去反推物質A在該實際樣品R中的含量了。

2. 內標法。

將已知量待測物質A的同位素標記物I摻雜到實際樣品中去,然後進行質譜分析。同位素標記物一般是利用H原子的同位素氘,即A裡面的H在其同位素裡都換成了氘,這樣通過A的化學式就能推算出,A和I的質譜峰的差別也就知道了。根據兩者訊號的比值和I的實際摻雜量就能推算出A的質量。

為什麼選擇同位素標記物進行標定呢?原因就是因為兩者之間的各種物理和化學屬性非常接近,除了分子量的差別幾乎可以認為一模一樣,因此就可以排除由於樣品中基質的干擾(離子抑制之類的)引起的誤差。值得一提的是這種情況在外標法裡是無法避免的。

當然實際上為了簡化流程或者實在是不好找同位素標記物(實際上有大量的同位素標記物可以買到),或者節省成本以及其他原因,往往採用其他不是同位素的物質做標記物,當然標準還是要往物性相似上去貼的。這樣做出的定量結果,在一定程度上也是可以接受的。

按理說保持完整性還得分析個優缺點,不過今天不想分析了,不能為了科普不幹正事了。真是這一行的各位,直接去找本教材看看吧,都是常識。

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