1樓：kII
做過Blind Passage，就是在不知道是什麼病毒的情況下進行分離。
先是準備好細胞。經典VERO，MDCK，BHK之類的，根據宿主的特徵選細胞。
然後放測試的標本，持續觀察，根據細胞增長情況，大概5天一次Passage。passage是為了控制細胞數量，要是太多細胞會啟動自殺機制，會影響結果，第二是為了提高病毒的濃度，促使其出現CPE。
一般是5次Passage，其中有變化的標本就取上清液，去做RT-PCR，然後有在相應位置上出現Band的，就Sequencing，確定標本的DNA序列。
2樓：脆皮兒
我來答一下工業上的蛋白病毒疫苗是如何被分離出來的。
首先，並不是所有的病毒都在同一種宿主體內培養，我們需要大腸桿菌，酵母菌等多種小動物幫我們生產。我們知道病毒由兩個部分組成，衣殼蛋白和遺傳物質。作為常見的疫苗來講，我們只需要衣殼蛋白而不需要DNA，RNA讓他們在身體內複製。
所以我們就會告（qiang）訴（po）大腸桿菌，我們需要這種蛋白啦。通過基因修飾的方法控制了大腸桿菌，這時候聽話的細菌們就開始沒日沒夜的給你幹活，給你產生病毒蛋白。
最後的最後，你需要做的就是他們都殺了，通過離心和過濾的方法，得到你想要的蛋白，甩掉不想要的屍體。
這時候問題來了，屍體辣麼多，成分辣麼複雜，科學家們是怎麼知道你想要的蛋白質是不是分離出來了呢，這時候你就需要……噠噠噠……液相色譜的幫助啦！
色譜(chromatography)是一種非常常見的分離手段，在醫藥，分析化學，化工領域廣泛的使用。通俗的解釋呢，是利用固定相和流動相的特性進行分離。比如說我們常見的用沙子淨水，就是發現沙子的細孔只能允許小分子水的通過，再大的物質就留在了沙孔裡。
這就是靠物質大小進行分離。當然我們還可以靠帶電性，生物特異性結合，親水性，疏水性，生物標籤等多種方式分離。
如果是大分子病毒的衣殼蛋白，我們還需要體外組裝起來。最後乙個可愛的病毒外殼就被我們創造出來啦。
3樓：女公爵shi
我在實驗室分離過細菌病毒，就是噬菌體。這個不難，首先明確宿主菌，比如熟悉的大腸桿菌，先採集土樣或者水樣，用液體牛肉膏蛋白腖進行搖培，同時要加入宿主菌即大腸桿菌，搖培12～18個小時（沒有嚴格時間要求）後，離心，細菌過濾器過濾，得到原液。然後就是宿主菌與原液放一起靜置15分鐘左右，倒雙層牛肉膏平板培養，之後會有噬菌斑出現。
大概過程是這個樣子，沒有講太詳細，但是這個方法確實可以分離的到。現在很多實驗室都做噬菌體，分離方法可能有些差別。
4樓：前浩
第一次試手，求指教。
病毒對宿主是有嗜性的，分離特定種類的病毒首先需要可以允許其侵入並複製的宿主，從單一種類的細胞群到實驗動物。實驗動物的話通過反覆在其體內傳代可以提高病毒的毒力，不過沒做過不了解了，只好說說細胞傳代。通常在傳代前要考慮到宿主細胞、病毒樣品（各種體液、組織塊啊）、病毒感染劑量（已知時可用TCID50作參照，未知時就得做個樣本梯度稀釋了然後選最佳的那個）、病毒量檢測方法（又分為活病毒檢測和病毒成分檢測），還有就是檢測的間隔時間，一般慢病毒每隔一段時間收集細胞培養液檢測，烈病毒就要注意了，會有很快的細胞病變效應。
細胞感染病毒後代謝會變快，也要適時的加入新細胞維持病毒工廠的正常運轉。
病毒分離可以說上一千零一夜，事實上病毒在細胞內傳代已經有了相對固定的流程和步驟，推薦一本《cuurent protocals in immunology》入門，涉及到生物安全、動物倫理啊、實驗操作介紹的都很詳細。有需要的可以搭訕我，休息日還在實驗室乙個人真是好淒涼啊。
5樓：Rapunzel
上學期剛學完微生物怒答一記～
病毒的實驗室分離主要有三種方法
一、動物接種
一般常用的動物有兔、鼠、猴、犬、牛等。在早期研究病毒主要通過動物接種，目前僅在研究病毒致病性及確定病原或進行疫苗及新藥評價時才進行動物接種。接種途徑有鼻內，皮下，皮內，腦內，腹腔及靜脈等。
但是動物接種成本比較昂貴，比如肝炎病毒最適合接種的動物是黑猩猩，但是其成本太高，老師說飼養條件跟人差不多，因為對實驗動物要遵守人道主義.......這裡就不上圖了，可能會有些殘忍...
二、雞胚接種
雞胚與雞蛋是不一樣的，雞胚是已受精的卵發育成的雞的胚胎，比普通雞蛋要大一些，也貴一些。
有些病毒，如流感病毒、痘病毒和腮腺炎病毒等可在雞胚中進行分離培養，如圖
接種後觀察雞胚活動與死亡情況，取尿囊液或羊水進行血凝實驗測定病毒。
簡單介紹一下血凝試驗，病毒的結構分為核心和外衣殼，核心為核酸，即DNA或RNA，外衣殼為包裹在外的一層蛋白質，上面鑲嵌有一些表面抗原，其中，HA抗原即是介導血凝反應的抗原，又稱血凝素。關於血凝試驗第乙個回答中已貼圖，不再重複。
三、細胞培養
將離體活組織塊或分散的組織細胞在培養瓶內生長，接種病毒後進行分離鑑定，是目前最常用的基本方法。用於培養病毒的細胞有三種：
1.原代細胞：指來自動物、雞胚或引產胎兒的組織如猴腎細胞、雞胚細胞或人胚腎，直接用蛋白酶消化獲得。
據老師描述...在雞胚即將破殼而出的時候（是的我也覺得這個形容非常千鈞一髮...)把它取出來，用剪刀剪呀剪，然後用蛋白酶液消化，得到的就是來自雞胚的原代細胞。
由於原代細胞對多種病毒的易感性高，故主要用作從標本中分離病毒。
2.傳代細胞：傳代細胞系是指可在體外連續穿代的細胞，大多數來自腫瘤組織或二倍體細胞，這些細胞系的染色體與正常細胞不同，為多倍體，所以不能用於研製疫苗，只用於分離病毒。
3.二倍體細胞：二倍體細胞是在體外連續傳代50-100代後仍保持其二倍染色體數目的細胞，這是乙個生物學上的定義。
這種細胞株多數用人胚肺組織建立，既可用於分離病毒，也是人用疫苗生產中首選的細胞株。
以上都是分離方法，至於CPE等都是後續的觀察，不再敘述。
6樓：
分離病毒第一步： 採集樣品： 尿液，唾液，病變組織等第二步：處理樣品：稀釋，勻漿，生理鹽水抗生素等處理。
第三步：將處理好的樣品接種於病毒敏感細胞或者動物：例如MRC5,VERO,BHK等細胞，或者接種到易感動物體內。
第四步：通過細胞病變效應， PCR，血凝，ELISA等手段檢測病毒是否複製繁殖。
第五步：收穫病毒
第六步：重複3，4，5步以擴增和純化病毒（單轉殖化）。
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