pcr這樣跑出來的條帶正常嗎?出了啥問題

時間 2021-05-05 19:00:59

1樓:福爾摩伍

首先,看你的幾個lane,說明你配的膠還沒凝好你就拿來跑了,膠濃度也太低了,可以試試用1.5%的膠,而且用的電壓估計還不小。

其次,你的樣品就沒有形成正常條帶(第一lane的樣品是正常的,這樣的才對),非特異性擴增太多了,條件可能還需要優化。

這些實驗時間成本很低,多試就好了,奧利給!

2樓:

你的條帶太虛了,就是大概率是可能猶豫引物的Tm值不合適,假如你的模板足夠,可以做乙個梯度pcr找出最合適的Tm值,這樣你做實驗的時候你的pcr產物就很集中!

不要太相信合成引物公司給你的建議tm值,你要用pcr儀器一次就可以做成了,很容易的就可以測出tm。

最後就是膠濃度問題了,或者是上樣量問題。你可以在最適合tm值出來後,做乙個20ul體系的pcr,然後每次用5ul點樣,測最適合膠濃度。

很快你就可以解決問題了!加我!!!!!!!!!

3樓:

能想到的幾個可能性:

膠沒配好。試一下新鮮的buffer,注意倒膠時候不要太涼了導致凝固不均勻,還有注意清潔梳子,防止梳子上有殘膠雜質啥的汙染膠孔影響DNA進入膠的速度

電泳過程。電壓不要太高,小膠110V就夠了,大塊膠150V左右也差不多了。還有檢查電泳槽裡電線有沒有彎曲啥的。電泳液如果反覆用太多次也可以換新的試試

DNA樣品。你的PCR反應液不知道是不是自帶loading dye的,不是的話你自己加的loading dye可以看一下是不是過期太久或者你的稀釋倍數不對。換新的試試

Good luck!

4樓:陽光下的燦爛

PCR的產物應該是非常集中而且明亮,跟marker平行,有拖尾的都是不正常的。乙個可能是你的引物特異性不足。或者是你配置膠體,它是不是有點問題,濃度方面,或者電壓問題。

而且最靠右邊那一排明顯的它的這個跑膠的速度是滯後的,而且它的那個形狀也不是呈一條直線。

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