近期在做電泳實驗,但是為什麼條帶都在上部,

時間 2022-01-13 23:48:24

1樓:ZONE

1.兩膠板之間電泳液要補一下,有些時候兩板沒有你看到的夾得那麼緊,會漏液,導致電流會減小很多,需要勤補;

2.有濃縮膠嗎???

3.膠的濃度依據你目的蛋白的分子量調一下,目的蛋白分子量越小,需要越高的膠濃度才能和雜蛋白分離得比較開,但是相應的電泳時間也會增加。具體多少濃度對應多大分子量蛋白,了解渠道很多。

當然你做western blot的話膠濃度低一點沒事,但一定要看marker情況避免目的蛋白跑出去了;

4.你的Marker上得太多了,膠圖上會很不好看,而且可能影響你對分子量的判斷,並且如果你在上樣後補兩板之間的電泳液,可能把你的Marker吹到別的孔去影響目的蛋白含量判斷。一般5uL每孔足夠了,如果1.

0mm板子,梳子孔多一點,還可以再減一點用量;

5.我好像沒看到你的目的條帶???樣品變性充分了嗎?Loading buffer裡巰基乙醇是否失效了?

6.配膠用的緩衝液pH對嗎?我們一般濃縮膠mix用1M pH=6.8的Tris-HCl 配,分離膠則是pH=8.8 1M Tris-HCl。

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