1樓：gene小白
（1）看一下PCR試劑有沒有過期，或者用其它新的PCR試劑試一下，用該PCR試劑擴增一下簡單模板，比如質粒，逆轉錄產物cDNA等，以此排除試劑有沒有問題。(2)模板的問題，有沒有拿錯模板，或者重新測一下模板的濃度，排查一下模板有沒有降解（3）引物問題，引物水溶後放-20度放個兩年都不會出現問題的（4）實驗室水的問題，這個應該用試劑配套的應該沒有問題 .為什麼提到這個問題呢，最近實驗室做實驗的人有點多，平時都放了一管公用的水，結果最近那管水用完了，不知道哪個人換的水，最近做實驗各種不順，一直懷疑重新合的引物不行，結果是水的問題，耳朵都冒氣了，加油！
2樓：虎紋鯊魚
建議加個陽性和陰性對照，如果陽性對照有的話，可能就是模板的問題。如果你設計的引物比較多，有可能是引物用錯了，或者上次就用錯了。
用的啥MARKER，430bp用2000MARKER就夠了吧
3樓：懶得想
從maker的情況看膠和試劑應該沒問題，可以考慮是模板或者引物的問題，可以從這方面入手重新做模板和引物。有可能是由於反覆凍融導致核酸降解。
4樓：黃鼠狼精Morrica
PCR 是乙個玄學問題，我的解決方法是，在試驗台上擺乙個斑馬花盆，做之前澆個水，祈禱一下，因為斑馬——馬上有條帶
自從有了「馬上有條帶」，陰性對照都有條帶了呢（bushi
ps. 不是廣告，這個花盆是樹脂的，還挺貴的（圖是網圖）
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