我們做免疫組化和WB一般是採用二抗顯色,為什麼不直接用標記物標記一抗?

時間 2021-05-30 22:16:18

1樓:江小寶

首先,一抗是一對一,二抗是一對多,這涉及到成本問題。其次,乙個一抗可以被好幾個二抗識別並結合,這涉及到訊號放大。

舉個栗子,首先假設乙個蛋白上只能結合乙個抗體,乙個抗體可以結合4個抗體(別問我為什麼這樣假設,假設就是假設)。如果你要檢測4個不同的蛋白:A、B、C、D,那可以識別A的一抗就只能識別A,不能識別其他的蛋白,其他一抗也一樣。

然後,這個一抗可以是鼠抗、羊抗、兔抗等等,我們假設你用的是鼠抗。如果你要用標記的一抗來檢測的話,就需要4種酶標一抗(注意是酶標一抗,價錢可能是普通一抗的2倍甚至更多),每個蛋白可以被檢測的訊號值是1;如果我用乙個酶標記的羊抗鼠二抗來檢測你這幾個蛋白,那麼我只需要乙個酶標二抗就可以了,而且每種蛋白可以被檢測的訊號值是4。

不過這種多一道程式的方法肯定沒有直接用酶標記一抗去檢測來的直接和準確,其實隨著現在檢測靈敏度的提公升和標記技術的成熟和普及,未來直接用一抗來檢測並不是很遙遠的事情,畢竟現在市面上也有不少能夠提供用量大的標記一抗或者標記服務的公司。說到底還是錢夠不夠燒,哈哈哈

2樓:「已登出」

一抗:可以特異結合底物,就是識別出我們想要檢測的東西。一抗和底物結合與否用肉眼是看不出來的。

二抗:可以和一抗結合,並帶有可以被檢測出的標記(如帶螢光、放射性、化學發光或顯色基團),作用是檢測一抗。 如果一抗自己帶有可以被檢測出的標記(如帶螢光、放射性、化學發光或顯色基團),則不需要二抗。

但這樣成本很高,因為一種一抗只識別一種底物。所以如今的設計一般是二抗帶上可檢測標記,再來檢測一抗。而一抗識別底物。

這樣,當一抗結合到底物上,就可以通過二抗檢測出來。

3樓:現世基本法傑斯

一抗直接顯色也可以。一分子一抗可以結合不只一分子二抗,所以能放大訊號。

為了顯色要構建酶聯抗體,使用二抗只需要構建一種酶聯二抗,不使用二抗的話每做一種蛋白就得構建一種酶聯一抗,經濟上不划算。

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