高效液相色譜法怎麼分析譜圖

時間 2021-10-17 08:13:36

1樓:遇葵

sigma中國官網對高效液相色譜法怎麼分析譜圖有詳細的實驗流程,生物分子是活細胞產生的大分子聚合物,作為活生物體的基本組成部分執行許多生命必需的生物過程。生物分子主要型別包括蛋白質、多肽、多核苷酸、醣類、脂質、維生素和輔酶。確定大分子性質和生物分子結構、其化學多樣性、生物活性必要性以及複雜基質,都需採取有效的鑑定技術。

儘管現有很多分離和分析技術可供選擇,最常用的還是高效液相色譜法(HPLC)。憑藉豐富的官能團和構象,HPLC生物分子分析提供了反相、體積排阻或離子交換等多樣的選擇。無論採用哪種分離方式,準確可靠的生物分子分離的關鍵都是高效的色譜柱填充和一致的固定相顆粒化學。

2樓:秋碩

色譜圖其實簡單地講是乙個橫座標是時間縱座標是電訊號的二維圖譜。

高效液相色譜法,你可以簡單地想象,固定相是乙個多空海綿狀的柱形結構,樣品在孔洞中進進出出。因為各個物質的吸附能力不同,所以才會在色譜圖中拉開距離。

保留時間是溶質通過色譜柱所需的時間。這種特性可以在一種混合物的幾個組分之間共享,這就是為什麼應用MS方法的原因。由此產生的色譜圖顯示保留時間與強度(存在的組分量)的關係。

保留時間是溶質通過色譜柱所需的時間。這種特性可以在一種混合物的幾個組分之間共享,這就是為什麼應用MS方法的原因。由此產生的色譜圖顯示保留時間與強度(存在的組分量)的關係。

如果使用同樣的色譜柱,同樣的流動相,分析同樣的樣品,那麼這個樣品的保留時間,應該是固定的。不同保留時間的色譜峰,應該表現出的是不同的物質。如果你跑的是反相色譜,那麼色譜峰越靠後,它對應物質的極性也就越小。

2、峰面積:也就是可以定量的資料引數

峰值檢測在濾波之後進行,其中峰值表示成分或成分的斷裂。峰可以根據它們覆蓋的高度或面積來選擇。通過將存在的峰與已知的峰進行匹配,可以通過眼睛識別某些峰模式。

這可以幫助確定存在什麼分子,或者分子中存在多少原子。

色譜圖中可以讀出來的引數,在同乙個色譜條件下,同乙個物質的濃度和峰面積是成正比的。也就是說,如果你配製1.0mg/ml的X物質,進樣後峰面積是10000,那麼,你配製0.

5mg/ml的X物質,進樣後峰面積差不多就是5000

3、波長:這個是可以順利進行試驗的前提條件

同一樣品,同一方法,同一色譜柱,在不同波長的峰面積是不同的。乙個物質指在某些特殊波長下有吸收。比如乙個物質在210nm和254nm處有吸收。

那麼波長在280nm處可能無法檢出該物質。所以乙個實驗方法開始時要進行波長掃瞄。

如何用反相色譜法對於親水性化合物進行分離純化呢?

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