1樓：Myyyyy
檢查模版是否放置室溫太久講解了（可以點樣時候加乙個原始模板）
用的酶會不會室溫太久失效了（用乙個陽性對照）
重新PCR程式檢查程式
2樓：YingjunZhang
你說這種情況，建議檢視引物儲存有無問題，因為每次換完新引物就可以擴出來，也可能不是引物位置問題，而是由於儲存不當引物失效。可以通過使用之前擴出來的產物稀釋後作為模板，用擴增它的引物再次擴增看看是否能擴出來，這樣最起碼可以排除模板問題。
3樓：
PCR最容易出問題的無非就是兩個變數，引物和模版。
因為酶和buffer都是凍著的，配好的，只要你每次操作正確，正常儲存，一般情況下都沒啥事兒。
所以，你就做幾個對照，大概就能找到問題的方向了。
引物，乾粉和母液留底，方便之後比較。
模版，提純好後，分裝，驗證是不是有降解和汙染的情況。
上述的前提是你的其他實驗條件包括PCR儀，水等因素保持不變。
寄己的問題寄己去解決吧！祝好。
4樓：
這種P不出來的情況我也遇到過，排查了所有步驟，後來發現是PCR儀溫控模組壞掉了
這種情況是很常見，只是導致這種情況的原因實在是太多了，儀器裝置是否正常、實驗材料是否正常、設定的條件是否需要調整等等，看你的描述，感覺問題可能出在引物或者模板上面，有可能儲存不當受到汙染降解了，可以試試去別的實驗室，借用一下它們的儀器裝置試一下。對了，戴好手套做。
分子生物學的問題排查起來很費時費力，最好換新的材料，用之前成功的條件再做一遍。有時很詭異什麼都不變隔兩天再做能P出來，就可能是之前實驗的某個步驟細節出了小問題，這次避免了，但這種自己就很難自知自覺。
科研不易 ，加油了
5樓：花酒少女
飯時一答。雖然我作為乙個學術辣雞...但是pcr失敗我有pile of experiences。
你這個問題有細節問題描述的還不夠詳細，比如是做subclone還是genotyping，如果做subclone一般是不需要反覆做同一對引物的PCR的，所以我對此有點困惑。另外也沒有說明pcr做不出來的形態是什麼樣的。Lane是一片糊還是什麼都沒有，還是引物二聚體。。。
等等。失敗也是有各種樣式的，被實驗摧殘的我如是說。
Trouble shooting有幾個方面可以尋找：試劑和儀器。
試劑方面有很多問題可循。引物，模板，酶或者mix都有可能。1.
對於引物：因為是多次使用過的引物，所以不考慮引物不好而考慮多次凍融導致降解，解決問題就是重新訂購新引物再進行嘗試。2模板：
濃度是否因為降解變低或者導致結合位點結合不上去，解決方法也是要重新制模板另模板濃度測定一下是否還在酶所要求的濃度範圍。3. 酶或mix：
有乙個薛丁格的定律就是：你永遠不知道其他實驗室成員在什麼時候把什麼試劑放在室溫多久，所以簡單粗暴，重新換乙隻酶
對於儀器：如果結果不穩定有可能是pcr儀不穩定或者不乾淨。解決方法：換別的lab的pcr儀嘗試，或者將pcr儀的放置樣品位置裡裡外外用酒精擦一遍再晾乾重p試試。
還有一些tips。。。然而我吃完飯了。。。同為實驗狗，加油啦( _)
6樓：desperate
1、同時用mix做乙個其他基因的pcr，檢測mix有沒有問題，記得看看你的mix延伸速度，別是混用了其他人的mix，延伸太慢了肯定擴不出來。如果你的引物可以pcr其他東西有條帶，也可以試試，看看引物有沒有問題。
2、改變PCR退火溫度，有雜帶就提高溫度，沒條帶就降低溫度，或者用降落PCR程式，依次遞減退火溫度，試試能不能行。
3、如果mix沒問題，改變溫度沒有影響，就推測引物或者模板有問題，看看是不是儲存DNA的冰箱溫度不夠低，我實驗室一般常用的DNA模板和引物儲存溫度是-20℃，不常用的放在-60℃或者-80℃。你可以設計新的引物，把原引物PCR不出來的模板包含進去，然後擴增出來轉T載體上然後送測序，用T載體上的引物作為測序開始的兩端，避免測序兩端不準確的情況。然後比對序列是不是引物的地方突變了。
4、如果測序序列沒問題，應該就是引物降解了，那就確實是你的引物沒有儲存好。
7樓：Organ
原來這個問題是大家都會遇到的 ，之前我也遇到過，至今沒有再出來。建議把所有東西換一遍，從頭開始，某乙個環節出問題都會導致沒有條帶，與其不斷的排查，不如從頭再來！
為什麼以前一直很好的朋友慢慢就關係就淡了？
兩種可能 1 從根源上你們就不是所謂的好朋友，可能只是你單方面認為的好朋友 2 認識乙個人不是一瞬間就定格的事，認識 在這裡是乙個延續性動作，它會一直貫穿你們的這段關係，而且稍不注意就可能因為很多看似離譜的原因改變對乙個人的看法 然而我也有一點私心的，從小到大這麼多年我沒有遇到過這麼有緣分這麼聊得來...
大學不喜歡自己的專業，但是一直學的很好是一種什麼體驗？
Stater 在大學裡這種人很多，很多同學在上大學前從來沒想過自己要從事什麼職業，高考報志願都是看名字，根本不知道要學什麼內容。再加上調劑，讓這種情況更多。大學有很多時間可以自己學習，大學發現自己真正的興趣不晚，喜歡什麼就學什麼好了。 人生如逆旅 有 好奇你怎麼知道的 說不上喜歡不喜歡，但是有一部分...
為什麼一直睡的的枕頭，突然就感覺不舒服了
蘭帛 傳統枕頭用久了會失去彈性，舒適度就降低了，你可以買格蘭貝恩羽絨枕，羽絨的彈性你睡著一直舒服。羽絨枕你保養的好，多用幾年都不是問題。我們了解羽絨枕是枕芯中較輕 最防寒保暖的商品，但一樣是羽絨枕，一些標明鴨絨，一些標明鵝絨，這彼此之間究竟有什麼不同？為何價錢相距挺大呢？說到羽絨枕，人們最先要掌握羽...